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產(chǎn)品目錄
小鼠脾臟淋巴細胞分離液試劑盒LTS1092PK
更新時間:2015-12-14 點擊量:780

小鼠脾臟淋巴細胞分離液試劑盒LTS1092PK

 

小鼠脾臟淋巴細胞分離液試劑盒說明書
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:
 

 

名稱

產(chǎn)品編號

規(guī)格

 

 

 

 

A

XXXX 動物脾臟組織淋巴細胞分離液

 

200ml

 

 

 

 

B

樣本稀釋液(贈品)

2010C1119

200ml

 

 

 

 

C

清洗液(贈品)

2010X1118

200ml

 

 

 

 

D

液(贈品)

F2013TBD

200ml

 

 

 

 

E

說明書

 

 

 

 

 

 
【實驗前準備】
 
A 適用儀器
 
zui大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
 
B 耗材
 

 

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品貨號

產(chǎn)地

 

 

 

 

 

15ml 離心管散裝

339650

美國 NUNC

 

 

 

 

 

15ml 離心管架裝

339651

美國 NUNC

 

 

 

 

 

50ml 離心管散裝

339652

美國 NUNC

 

 

 

 

 

50ml 離心管架裝

339653

美國 NUNC

 

 

 

 

 

無菌膠頭滴管或塑料滴管

 

 

 

 

 

 

【檢驗方法】

 

 

 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2的條件下進行。
 
1. 首先制備脾臟組織單細胞懸液,制備方法詳見脾臟組織單細胞懸液制備技術(shù)
 
2. 取一支 15ml 離心管,加入與脾臟組織單細胞懸液等量的分離液(注:分離液zui少不得 少于 3ml)。
 
3. 用吸管小心吸取脾臟組織單細胞懸液加于分離液液面上,400-500g,離心 20-30min。(注: 根據(jù)脾臟組織單細胞懸液量確定離心條件,脾臟組織單細胞懸液量越大,離心力越大, 離心時間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到分離效果)。

 

 
4. 離心后,此時離心管中由上至下分為四層。*層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色淋 巴細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。
 
5. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細胞層到另一 15ml 離心管中,向離心管中加入 10ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細胞。
 
6. 250g,離心 10min。
 
7. 棄上清。
 
8. 用吸管以 5ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細胞。
 
9. 250g,離心 10min。
 
10. 重復(fù) 7、8、9,棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。
 
【注意事項】
 
1. 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2的條件下進行。為獲得的實驗結(jié)果,zui 好在取樣 2h 內(nèi)進行實驗,樣品存放時間越長,細胞分離效果越差。樣品放置超過 6h  分離效果更差甚至不能達到分離目的。
 
2. 本實驗不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離 心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面 會變成毛面,影響細胞分離效果。
 
3. 吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒
 
細胞數(shù)量增加。
 
4. 分離液用量大于脾臟組織單細胞懸液樣本時,分離效果更佳。
 
5. 如實驗后細胞得率或活性過低,請以尋求幫助,具體詳 見下方生產(chǎn)企業(yè)信息。
 
【儲存條件及有效期】
 
18-25保存,有效期 2 年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
 
封后置常溫保存。如 4保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
 
【參考值(參考范圍)】
 
本實驗淋巴細胞提取率及純度均大于 80%
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例,用戶可適當進行參考。
 

 

紅細胞

 

白細胞

血小板

 

 

 

 

 

 

 

 

含量(個/L

4.0-5.5×1012

4.0-10.0×109

1.0-3.0×1011

 

中性粒細胞

淋巴細胞

單核細胞

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


 
 
 
50%-70% 20%-40% 3%-8%
 
【相關(guān)實驗技術(shù)方案】
 
1. 脾臟組織單細胞懸液制備技術(shù)。
 
2. 所獲得淋巴細胞的培養(yǎng)技術(shù)。
 
3. 所獲得淋巴細胞的核酸提取技術(shù)。
 
4. 所獲得淋巴細胞的鑒定方法 A.流式細胞技術(shù) B.免疫組化技術(shù)
 
C.原位雜交技術(shù)
 
D.PCR 技術(shù)
 
注:上述技術(shù)方案詳情請登陸本搜索細胞分離、
 
純化、擴增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊,并在說明書項目欄下下載使用。
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
 

出現(xiàn)情況

出現(xiàn)原因

建議解決方案

 

 

 

 

 

離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層

轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短

適當增減轉(zhuǎn)速

 

 

 

 

離心后目的細胞存在于分離液中

轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長

 

 

 

 

 

 

 

離心后白環(huán)層彌散

細胞密度過大

調(diào)整細胞密度

 

 

 

 

離心后白環(huán)層太淺或看不見

細胞密度過小

 

 

 

 

 

 

 

 
2. 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地 區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時,恒定離 心時間,對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。
 
3. 本分離液依照標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可 能出現(xiàn)紅細胞沉降不*的情況,可以適當加大離心轉(zhuǎn)速。
 
注:在對離心條件進行調(diào)整時,離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達到分離效果,
 離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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