久久久久欧美精品日韩精品,中文字幕亚洲综合小综合,久久精品国产欧美高清,韩日三级成年人的电影

網(wǎng)站首頁技術中心 > MC38+luc小鼠結腸癌細胞+luc傳代/復蘇技巧
產(chǎn)品目錄
MC38+luc小鼠結腸癌細胞+luc傳代/復蘇技巧
更新時間:2024-07-17 點擊量:367

MC38+luc小鼠結腸癌細胞+luc

Mouse Colon Cancer Cells ,MC-38 luc

貨號:YJ-0068a(MC38種屬鑒定)

價格: 3200.0

規(guī)格: 1*10 6

細胞介紹

結腸癌;雌性;C57BL/6該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。

細胞特性

1 來源:結腸癌

2 形態(tài):上皮樣,半貼壁半懸浮細胞

3 含量:>1x106  細胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5 用途:僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為穩(wěn)定轉染Luc的細胞,隨細胞傳代次數(shù)的增加,其Luc熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。        

建議收到細胞后至少傳3代,凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

11mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請在45X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)半貼細胞和貼壁不牢(懸浮)細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細胞的情況,若細胞密度在60%以下,客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代,傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收。

4備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。

細胞培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1)準備 DMEM 基礎培養(yǎng)基                   (YJ-0001)                       85%

      優(yōu)質(zhì)胎牛血清                                       YJ-0500                   10%

      MEM NEAA非必需氨基酸                (YJ-01000)                     1%

     Sodium Pyruvate丙酮酸鈉                       (YJ-01100 )                   1%

     GlutaMAX-1谷氨酰胺                             ( YJ-0900 )                     1%

     HEPES                                           (YJ-01200)                    1%

     P/S青霉素-鏈霉素                          YJ-15140-122             1%

2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3 凍存細胞:凍存細胞時,用FBS重懸細胞,然后加入一定量的DMSO,輕輕混合均勻后移入到凍存管中,DMSO終濃度為10%。

二. 細胞處理:

1)凍存細胞的復蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2 細胞傳代:如果細胞密度達70%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

該細胞為輕微貼壁和懸浮培養(yǎng)的細胞,傳代可以參考以下方法:

1. 收集:將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mLT752-3mL)置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min,棄去上清,補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

MC38+luc小鼠結腸癌細胞+luc.png


下面T25瓶為例;

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項

1.收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2.收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細胞密度而定)穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。

3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。

4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2011年開始我們致力于在生命科學領域、生物醫(yī)學實驗技術及論文潤色服務,協(xié)助客戶各類實驗服務及論文潤色十余年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

實驗技術服務:


滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

精品老熟妇一区二区三区-日韩丰满一区二区三区| 欧美日韩国产综合四区-爆操极品尤物熟妇14p| 国产精品成人欧美激情-黄色床上完整版高清无遮挡| 亚洲中文一二三av网-亚洲天堂成人免费在线| 欧美亚洲另类久久久精品-国产精品一区二区亚洲推荐| 中文不卡一区二区三区-老司机在线老司机在线一区| 午夜福利1区2区3区-午夜洗澡免费视频网站| 日本高清二区视频久二区-大香蕉在线视频大香蕉在线视频| 三上悠亚免费观看在线-青青草原在线视频观看精品| sobo欧美在线视频-免费av网址一区二区| 成人免费黄色在线网站-日韩精品一区二区三区四区在线| 中文字幕日韩精品不卡一区二区-成人av在线观看一区二区| 国产一区二区三区四区五区麻豆-欧美一级在线视频播放| 国产欧美日韩中文字幕在线-国产伊人一区二区三区四区| 免费看黄色污污的网站-欧美一区二区三区爽爽| 免费午夜福利在线观看-黄色日本黄色日本韩国黄色| 中文字幕日韩不卡久久-五月天中文字幕啊av| 国产欧美日韩中文字幕在线-国产伊人一区二区三区四区| 久久影视av一区二区-人妻激情乱偷一区二区三区| 黄片黄片在线免费观看-激情综合网激情五月俺也去| 小12萝自慰喷水亚洲网站-chinese偷拍一区二区三区| 性都花花世界亚洲综合-日韩av一区二区三区| 欧美日韩国产在线资源-超碰成人国产一区二区三区| 亚洲愉拍自拍欧美精品app-亚洲一区不卡在线视频| 欧洲精品一区二区三区中文字幕-91久久国产综合久久蜜月精品| 亚洲国产欧美日韩不卡-熟妇激情一区二区三区| 国产欧美一区二区三区嗯嗯-欧美一区二区日本国产激情| 欧美亚洲另类久久久精品-国产精品一区二区亚洲推荐| av网址在线直接观看-黄色av全部在线观看| 久艹在线观看视频免费-人妻偷人精品一区二区三区| 欧美字幕一区二区三区-好吊妞欧美一区二区在线观看| 99久热精品免费观看四虎-亚洲天堂精品视频在线| 午夜福利1区2区3区-午夜洗澡免费视频网站| 亚洲欧美另类综合偷拍-婷婷社区综合在线观看| 欧美日韩黑人在线播放-51在线精品免费视频观看| hd在线观看一区二区-免费一区二区三区毛片在线| 国产在线观看高清精品-四季av一区二区三区中文字幕| 国产aa视频一区二区三区-国产精品久久久久久久毛片动漫| 91九色蝌蚪丝袜人妻-国产精品9999网站| 一区二区三区国产高清mm-美女张开腿让帅哥桶爽| 亚洲愉拍自拍欧美精品app-亚洲一区不卡在线视频|