久久久久欧美精品日韩精品,中文字幕亚洲综合小综合,久久精品国产欧美高清,韩日三级成年人的电影

網(wǎng)站首頁技術(shù)中心 > HCT116+luc人結(jié)腸癌細胞熒光素酶標記傳代/復(fù)蘇技巧
產(chǎn)品目錄
HCT116+luc人結(jié)腸癌細胞熒光素酶標記傳代/復(fù)蘇技巧
更新時間:2024-07-15 點擊量:360

HCT116+luc人結(jié)腸癌細胞熒光素酶標記

Luciferase labeling of human colon cancer cells ,HCT116 luc

貨號:YJ-0045a(STR(HCT116鑒定))

價格: 3200.0

規(guī)格: 1*10 6

細胞介紹

HCT1161979M.Brattain等從患結(jié)腸癌的男性病人中分離的三株惡性細胞之一。 在半固體瓊脂糖培養(yǎng)基中形成克隆。HCT116在無胸腺的裸鼠有致瘤性,形成上皮樣的腫瘤。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶luc基因。

細胞特性

1 來源:結(jié)直腸癌

2 形態(tài):上皮細胞樣,貼壁生長

3 含量:>1x10 細胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細胞,隨細胞傳代次數(shù)的增加,其Luc熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。        

建議收到細胞后至少傳3代,凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

運輸和保存

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

11mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請在45X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1 準備McCOY's 5A(推薦YJ-0011 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗1%。

2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二.細胞處理:

1 凍存細胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mLT752-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

HCT116+luc人結(jié)腸癌細胞熒光素酶標記.png


下面T25瓶為例;

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項

1.收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2.收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細胞密度而定)穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。

3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。

4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十余年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

實驗技術(shù)服務(wù):


滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

五月婷婷六月在线观看视频-亚洲黑寡妇黄色一级片| 青木玲高清中文字幕在线看-视频在线免费观看你懂的| 黄片黄片在线免费观看-激情综合网激情五月俺也去| 国语自产偷拍精品视频偷拍-国产伊人这里只有精品视频| 亚洲午夜久久久精品影院-性感美女在线观看网站国产| 久久影视av一区二区-人妻激情乱偷一区二区三区| 国产午夜精品理论片A级漫画-久久精品国产99亚洲精品| 日韩二级视频在线观看-美女扒开奶罩露出奶子的视频网站| 国产精品熟女视频一区二区-国产日韩精品欧美一区喷水| 久久网址一区二区精品视频-日产国产欧美视频一区精品| 91大神国内精品免费网站-亚洲免费电影一区二区| 看肥婆女人黄色儿逼视频-秋霞电影一区二区三区四区| 国产成人精品免费视频大全办公室-亚洲欧美日本综合在线| 日韩国产一区二区三区在线-精品日韩人妻少妇av| 国产精品成人欧美激情-黄色床上完整版高清无遮挡| 深夜三级福利在线播放-日韩精品一区二区在线天天狠天| 一区二区国产高清在线-日本高清无卡一区二区三区| 天天日天天干天天综合-99久久综合狠狠综合久久| 欧美日韩国产综合四区-爆操极品尤物熟妇14p| 黄色av网站在线免费观看-亚洲欧美精品偷拍tv| 久久特一级av黄色片-91社区视频免费观看| 国产日韩电影一区二区三区-美女露双奶头无遮挡物| 午夜福利卫生纸福利院-一区二区三区久久亚洲| 国产一区二区无套内射-国内精品久久久久久久齐pp| 国产av一区二区三区日韩接吻-av网址在线播放网站| 欧美日韩国产综合四区-爆操极品尤物熟妇14p| 可以免费看污污视频的网站-日韩欧美不卡视频在线观看| 国产欧美一区二区三区嗯嗯-欧美一区二区日本国产激情| 一区二区三区女同性恋-熟妇高潮一区二区高清网络视频| 熟女少妇免费一区二区-麻豆一区二区三区免费在线观看| 久久高清超碰av热热久久-国产高清不卡免费视频| 国产美女网站在线观看-国产精品亚洲综合网69| 91蜜桃传媒一二三区-日韩欧美国产一区呦呦| 小12萝自慰喷水亚洲网站-chinese偷拍一区二区三区| 美女把腿张开给帅哥桶-无码无套少妇18p在线直播| 99在线免费观看视频-丰满人妻一区二区三区视频53| 成人免费资源在线观看-欧美国产日韩高清在线综合| 久久夜色精品亚洲噜国产av-大香蕉伊人猫咪在线观看| 婷婷人妻少妇激情在线-欧美日韩人体艺术一区二区| 亚洲中文一二三av网-亚洲天堂成人免费在线| 欧美精品午夜一二三区-a屁视频一区二区三区四区|