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人膽囊上皮細胞永生化+GFP傳代/復蘇技巧
更新時間:2024-07-15 點擊量:340

人膽囊上皮細胞永生化+GFP

Immortalization of human gallbladder epithelial cells

貨號:YJ-004a(免疫熒光鑒定)

價格: 3200.0

規(guī)格: 5*10 5

細胞詳述

膽囊,是位于右方肋骨下肝臟后方的梨形囊袋構(gòu)造,有濃縮和儲存膽汁之作用。膽囊壁由粘膜、肌層和外膜三層組成。

膽囊內(nèi)面以粘膜覆蓋,有發(fā)達的皺襞。膽囊收縮排空時,皺襞高大而分支;膽囊充盈時,皺襞減少變矮。粘膜上皮為單層柱狀,內(nèi)分散分部著少量杯狀細胞。膽囊粘膜細胞具有典型的吸收型細胞的特征,具有較強的吸收和濃縮功能,上皮細胞吸收膽汁中的水和無機鹽,經(jīng)細胞側(cè)面的質(zhì)膜轉(zhuǎn)運至上皮細胞間隙內(nèi),吸收的水和無機鹽通過基膜進入固有層的血管和淋巴管內(nèi)。同時,膽囊粘膜亦有分泌功能,分泌粘液。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。

細胞特性

1) 細胞來源于人膽囊組織。

2) 細胞鑒定:細胞角蛋白19(CK-19)免疫熒光染色為陽性。

3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5) 細胞生長方式:上皮樣,多角形細胞,貼壁培養(yǎng)。

細胞篩選

該細胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細胞,隨細胞傳代次數(shù)的增加,其GFP熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。

建議收到細胞后至少傳3代,凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

產(chǎn)品的運輸和保存

視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

1) 1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

2) T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

產(chǎn)品使用

1) 本產(chǎn)品僅能用于科研

2) 本產(chǎn)品未通過直接用于活體動物和人的審核

3) 本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核

人膽囊上皮細胞永生化+GFP.png


 

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