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MCF-7/adr 人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株傳代/復(fù)蘇技巧
更新時(shí)間:2024-07-10 點(diǎn)擊量:363

MCF-7/adr 人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株

Human Breast Cancer Adriamycin Resistant Cell Line ,MCF7/adr

貨號(hào):YJ-h253(提供MCF-7細(xì)胞STR鑒定)

價(jià)格: 2500.0

規(guī)格: 1*106

細(xì)胞介紹

MCF-7/Adr為由MCF-7細(xì)胞構(gòu)建的耐Adr藥物細(xì)胞株。

細(xì)胞特性

1)來(lái)源:人乳腺癌細(xì)胞耐藥篩選

2)形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長(zhǎng)

3)含量:>1×10^6  細(xì)胞數(shù)

4)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)用途:僅供科研使用。


細(xì)胞運(yùn)輸、保存及注意事項(xiàng)


復(fù)蘇細(xì)胞

凍存細(xì)胞

包裝

充液的T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

1mL凍存管

運(yùn)輸條件

常溫

干冰

保存方式

37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱

-80℃冰箱中保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮

或立即復(fù)蘇

注意事項(xiàng)

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細(xì)胞有污染;或凍存管有破損,融化、漏液等,請(qǐng)立即拍照并聯(lián)系我們。照片包括細(xì)胞培養(yǎng)瓶/凍存管外觀,顯微鏡下細(xì)胞照片(100倍,200倍各2張);

2. 若收到的復(fù)蘇細(xì)胞有少量細(xì)胞脫落、飄起,可能由于運(yùn)輸途中導(dǎo)致。請(qǐng)先于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2~3h后,再進(jìn)行處理;

3. 復(fù)蘇細(xì)胞的充液培養(yǎng)基為不含藥物的維持培養(yǎng)基,血清濃度較低,收到細(xì)胞后請(qǐng)及時(shí)更換為完全培養(yǎng)基;

4. 建議收到細(xì)胞后,首先進(jìn)行擴(kuò)增(至少3代),并凍存部分細(xì)胞以備用。

5. 初次培養(yǎng),當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)約80%時(shí),可加入400ng/mL ADR的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞完全融合后傳代。細(xì)胞傳代1~2次后仍能保持增殖,即可提高藥物濃度至500ng/mL繼續(xù)培養(yǎng);若此過(guò)程中細(xì)胞停止增殖,且狀態(tài)較差,則需降低藥物濃度(首次降低一半藥物濃度)或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞匯合度達(dá)80%左右,且生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí),再更換為所需的ADR藥物濃度。

6. 細(xì)胞凍存過(guò)程中,不可添加藥物。

細(xì)胞培養(yǎng)試劑的配制

1ADR藥物的配制及保存

建議將ADR藥物配制成1mg/mL的母液,即使用10mL PBS溶液溶解10mg ADR藥物,使其完全溶解后,使用0.22um濾器過(guò)濾除菌。

注意:可根據(jù)用量配置藥物,并將藥物分裝保存,避免反復(fù)凍融導(dǎo)致藥物失效。溶解后的Taxol,4℃保存1周,-20℃保存1個(gè)月,-80℃保存6個(gè)月。

2)凍存液的配制

90%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。(凍存液中不含藥物)

3)完全培養(yǎng)基的配制(推薦使用YJ-h253-001b

成分

體積/濃度

優(yōu)質(zhì)胎牛血清

10%

雙抗

1%

500ng/mL ADR

0.05%母液(1mg/mL

RPMI-1640培養(yǎng)基

補(bǔ)充至所需體積

細(xì)胞培養(yǎng)條件

氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%~80%。

細(xì)胞處理

1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4~6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,1000rpm/min離心3~5min,棄去上清液。加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,均勻鋪于含6~8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中,置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中過(guò)夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

注意:細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程中,不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度達(dá)80%左右時(shí),方可添加400ng/mL ADR藥物;若細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較為緩慢,可適當(dāng)降低ADR的濃度(首次降低一半藥物濃度),或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí),再更換為所需的ADR濃度。

建議復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩,避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸,造成人員傷害。

2)細(xì)胞傳代(建議以同等底面積的培養(yǎng)瓶/皿按照12比例傳代)

待細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí),即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1次,吸凈殘余的PBS

加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mL,T752-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化2~5min,顯微鏡下觀察細(xì)胞細(xì)胞大部分變圓并脫落,即可輕拍培養(yǎng)瓶至細(xì)胞全部脫落。迅速拿回操作臺(tái),加入2倍體積的、含10%FBS的培養(yǎng)基中止消化。

將細(xì)胞懸液移入離心管中,1000rpm/min離心5min,棄去上清液。

向細(xì)胞沉淀中加入1~2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,輕吹混勻。將細(xì)胞懸液按11的比例均勻鋪于2個(gè)新的培養(yǎng)瓶/皿中,添加6~8mL完全培養(yǎng)基。

注意:細(xì)胞傳代1~2次后仍能保持增殖,即可提高藥物濃度至500ng/mL繼續(xù)培養(yǎng);若此過(guò)程中細(xì)胞停止增殖,且狀態(tài)較差,則需降低藥物濃度(首次降低一半藥物濃度)或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞匯合度約80%,且生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí),再更換為所需的ADR藥物濃度。

3)細(xì)胞凍存

細(xì)胞凍存時(shí),步驟同2)細(xì)胞傳代的①~④,細(xì)胞計(jì)數(shù)后,加入配制好的細(xì)胞凍存液,重懸細(xì)胞,按照1×10^6 ~ 1×107個(gè)細(xì)胞/mL分配到一個(gè)凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

注意:細(xì)胞凍存過(guò)程中,不可添加藥物。

將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80℃冰箱中過(guò)夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

MCF-7/adr 人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株傳代/復(fù)蘇技巧


注意事項(xiàng)

1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十余年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):



滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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