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AML12小鼠肝細(xì)胞傳代/復(fù)蘇技巧
更新時(shí)間:2024-06-10 點(diǎn)擊量:347

AML12小鼠肝細(xì)胞

Mouse liver cells ,AML-12

貨號(hào):YJ-m003(種屬鑒定)

價(jià)格: 2500.0

規(guī)格: 1*106

細(xì)胞介紹

AML12α小鼠肝臟12)細(xì)胞系由來自針對(duì)人TGFα的轉(zhuǎn)基因小鼠(CD1菌株,品系MT42)的肝細(xì)胞建立。通過電子顯微鏡觀察,這些細(xì)胞表現(xiàn)出典型的肝細(xì)胞特征,例如過氧化物酶體和膽小管樣結(jié)構(gòu)。AML12細(xì)胞保留表達(dá)血清(白蛋白,α1抗胰蛋白酶和轉(zhuǎn)鐵蛋白)和間隙連接(連接蛋白2632)蛋白的高水平mRNA的能力,并且僅含有乳酸脫氫酶的同工酶5。細(xì)胞表達(dá)高水平的人TGFα和較低水平的小鼠TGFα。

肝臟特異性蛋白質(zhì)的表達(dá)在培養(yǎng)中隨時(shí)間降低,但通過在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞而重新激活。。

細(xì)胞特性

1 來源:小鼠,肝

2 形態(tài):上皮樣細(xì)胞 貼壁生長

3 含量:>1x10 細(xì)胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5 用途:僅供科研使用。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mL,T752-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

AML12小鼠肝細(xì)胞.png

下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

 

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