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總糖含量試劑盒說明書 微量法
更新時間:2021-05-27 點擊量:1747

                                                            規(guī)格:100管/96樣

總糖含量試劑盒說明書

微量法

 

正式測定前請選擇2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:

糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一,也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)。總糖也可稱為碳水化合物,包括可溶性的單糖,二糖以及不溶性的淀粉,纖維素,幾丁質(zhì)等。

測定原理:

總糖酸水解為還原糖,在 NaOH 和丙三醇存在下,DNS 試劑與還原糖共熱后被還原成氨基

化合物,在過量的 NaOH 堿性溶液中呈桔紅色,在 540nm 處有最大吸收峰,以此測定樣品中的總糖含量。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、沸水浴、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 100mL×1 瓶 ,4℃保存;

試劑三:液體 5mL×1 瓶 ,4℃避光保存

標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×10mg支,4℃保存;臨用前加入 1mL 蒸餾水溶解,制備 10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。

樣品中總糖的提取:

稱取約 0.1g 樣品,加入 1mL 試劑一,1.5mL 蒸餾水,勻漿,95℃水浴中加熱 30min,加入1mL 試劑二,混勻,用蒸餾水定容至 10mL,8000g 25℃離心 10min,取上清液待測。(注意稀釋,見注意事項)

測定步驟:

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至540nm,蒸餾水調(diào)零。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95度。

3、加樣表 :

試劑(μL)

標(biāo)準(zhǔn)

測定管

樣本

 

8

標(biāo)準(zhǔn)品

8

 

蒸餾水

8

8

試劑三

12

12

混勻,置 95 度水浴中 10min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻至室溫

蒸餾水

172

172

注意:如果ΔA大于3,需要將上清液用蒸餾水稀釋,計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

 

總糖含量計算:

1、0.750.5、0.4、0.30.2、0.10 mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液為橫坐標(biāo),ΔA 為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到線性回歸方程 y=kx+b,將ΔA´代入方程得到 xmg/mL);

1、按樣本鮮重計算

總糖含量(mg/g 鮮重)=x×稀釋倍數(shù)×V 提取÷W=10x÷W×T

V 提取:提取后體積,10 mL;W:樣品質(zhì)量,g;稀釋倍數(shù):T。

 

 

實驗代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測

CCK8檢測

HE染色

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化IHC染色

熒光定量PCR

動物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測

免疫熒光染色

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

石蠟/冰凍切片

透射電鏡服務(wù)

掃描電鏡實驗

蛋白雙向(2-D)

動物實驗

免疫共沉淀

原位雜交(FIsh

蛋白質(zhì)純化

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

組蛋白甲基化磷酸化乙?;?/a>

 

蛋白雙向2D-WB

 

藥理毒理動物實驗

 

番紅O固綠染色

明膠酶譜MMP

酶活性檢測

動物造模/模型實驗服務(wù)

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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