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細(xì)菌蛋白抽提試劑盒說明書
更新時(shí)間:2020-09-01 點(diǎn)擊量:1775

細(xì)菌蛋白抽提試劑盒說明書

 

Bacterial Protein Extraction Kit

 

目錄號:K0888

 

保存條件:Lysozyme、DNaseⅠ、蛋白酶抑制劑混合物-20℃保存,其他組分室溫保存。

 

組分說明

 

Cat. No.     K0888    K0888A

Size         25 次     100 次

Bacterial Protein Extraction Reagent 25 ml 100 ml

蛋白酶抑制劑混合物   250 μl     1 ml

Lysozyme (50 mg/ml)   50 μl     200 μl

DNaseⅠ(1,000 U/ml)   25 μl     100 μl

 

產(chǎn)品簡介

 

  細(xì)菌蛋白抽提試劑使用溫和的非離子型去污劑,適用于大腸桿菌表達(dá)的重組蛋白及

轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞的蛋白提取。提取過程中不需進(jìn)行超聲破碎,有效避免了外源蛋白的污

染。細(xì)菌蛋白抽提試劑盒在抽提試劑的基礎(chǔ)上添加了溶菌酶、DNase I和蛋白酶抑制劑混

合物,可提高蛋白提取效率并減輕因DNA引起的粘稠現(xiàn)象,有效避免蛋白降解。所提取

的蛋白保持了生物學(xué)活性,可進(jìn)行IP,Western Blot,蛋白純化等下游操作。

 

注意事項(xiàng)

 

1.細(xì)菌蛋白抽提試劑適用于從新鮮或凍存細(xì)菌中提取蛋白,也適用于從桿狀病毒轉(zhuǎn)染

   的昆蟲細(xì)胞中提取蛋白。

2.本品采用Tris緩沖系統(tǒng),蛋白提取后的純化操作,請使用相同的緩沖系統(tǒng)。

3.使用本產(chǎn)品獲得的蛋白裂解液,可用BCA或Bradford法進(jìn)行蛋白定量。

4.使用本產(chǎn)品從一系列常見的宿主菌中抽提可溶性蛋白,均有較好的提取效果。對于

   特殊的菌株,如果抽提效果不理想,可在抽提蛋白前冰凍細(xì)胞。

5.根據(jù)具體情況,可在本產(chǎn)品中加入蛋白酶抑制劑、鹽、螯合劑、還原劑。

 

                本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途

 

操作步驟

 

       ●  昆蟲細(xì)胞蛋白提取

     1.低速離心收集細(xì)胞。

     2.稱量細(xì)胞濕重,按10 ml/g的量加入細(xì)菌蛋白抽提試劑。

     3.重懸后,冰上孵育20分鐘(冰上放置時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型不同進(jìn)行調(diào)整)。

     4.15,000×g離心15分鐘,分離可溶性蛋白。

 

       ●  細(xì)菌可溶性蛋白提取

     1.5,000×g離心10分鐘,收集菌體。

     2.可選步驟:每1 ml 細(xì)菌抽提試劑中加入1 μl DNase I(1,000 U/ml)、2 μl Lysozyme

        (50 mg/ml)和10 μl蛋白酶抑制劑混合物,渦旋震蕩混勻。

     3.按照每克菌體沉淀加入20 ml細(xì)菌蛋白抽提試劑的比例 ,即按照1:20的比例,向菌體沉淀中加入抽提液,充分渦旋或用移液器上下吹打直至菌體*重懸。

     4.重懸后,室溫孵育10-15分鐘(放置時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型不同進(jìn)行調(diào)整)。

     5.15,000×g離心5分鐘。

     6.轉(zhuǎn)移上清至新的離心管中(上清中即為可溶性蛋白),進(jìn)行蛋白定量及下游實(shí)驗(yàn)。

        注意:如過表達(dá)的大部分蛋白仍在沉淀中,目的蛋白可能以包涵體形式存在,可使用包涵體蛋白溶解液(K0007)進(jìn)行溶解或優(yōu)化表達(dá)條件增加可溶性蛋白的表達(dá)。

 

   常見問題

1. 目的蛋白不溶

可能原因:目的蛋白表達(dá)為包涵體

解決方法:優(yōu)化表達(dá)條件或使用包涵體蛋白溶解液,在蛋白抽提試劑中加入Lysozyme  和  DNase I

2. 加入Lysozyme 后目的蛋白仍沒有提取出來

可能原因:溫度過低,Lysozyme活性降低或失活

解決方法:將使用試劑恢復(fù)至室溫,加入更多的Lysozyme或更換新的酶

3. 提取物粘度高

可能原因:DNase I 活性降低或失活

解決方法:a加入更多的DNase I 或更換新的DNase I

         b將鎂離子的終濃度增加至2mM

4. 蛋白抽提后仍有大部分蛋白存在于沉淀中

可能原因:蛋白量過大

解決方法:加入Lysozyme及DNase I

5. 蛋白抽提試劑有沉底析出

可能原因:溫度過低

解決方法:將蛋白抽提試劑恢復(fù)至室溫

 

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測

CCK8檢測

HE染色

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化IHC染色

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測

免疫熒光染色

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

石蠟/冰凍切片

透射電鏡服務(wù)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

蛋白雙向(2-D)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

免疫共沉淀

原位雜交(FIsh)

蛋白質(zhì)純化

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

 

蛋白雙向2D-WB

 

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

番紅O固綠染色

明膠酶譜MMP

酶活性檢測

動(dòng)物造模/模型實(shí)驗(yàn)服務(wù)

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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