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6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)試劑盒說明書
更新時間:2020-07-06 點擊量:2034

貨號: YJS2210 規(guī)格:50 管/48 

6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)試劑盒說明書

紫外分光光度法

產(chǎn)品簡介:

G6PDH 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是磷酸戊糖途徑的關鍵酶,催化 6- 磷酸葡萄糖氧化為 6 -磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯,同時將 NADP+還原為 NADPH,供生物合成及維持細胞內(nèi)的還原狀態(tài)用。因此 6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性的高低可以從一定程度上反映出生物體的生物合成和抗氧化能力。G6PDH 催化 NADP+還原生成 NADPH,在 340 nm 下測定 NADPH 增加速率。

試驗中所需的儀器和試劑:

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:液體 60 ml×1 瓶,4℃保存; 試劑一:液體 50 ml×1 瓶,4℃保存;

試劑二:粉劑×1 支,-20℃保存;用時每支加 550μl 雙蒸水充分溶解備用;剩余的 4℃保存一周

試劑三:粉劑×1 支,-20℃保存;用時每只加 550μl 雙蒸水充分溶解備用;剩余的 4℃保存一周

操作步驟:

一、樣品測定的準備

1、細菌或培養(yǎng)細胞:收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細菌或細胞數(shù)量104 :提取液體積(ml500~1000:1  的比例建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液超聲波破碎細菌或細胞冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 ,8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

2、組織:按照組織質(zhì)量g:提取液體積(ml1:5~10  的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 提取液,進行冰浴勻漿;8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)樣品:直接檢測。二、測定操作:

1分光光度計預熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、將試劑一置于 37℃(哺乳動物)或 25℃(其他物種)水浴中預熱 10min 左右。

3、加樣表

 

 

試劑名稱(μl

測定管

試劑一

750

試劑二

10

試劑三

10

樣本

30

加樣本的同時開始計時;混勻,在 340 nm 波長下記錄 1min 時的初始吸光度 A1 6min

時的吸光度 A2,計算ΔA=A2-A1

注意事項:

ΔA 大于 0.5,需將酶液用提取液稀釋,計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)?;?qū)⒎磻獣r間縮短至 2min,使 A2-A1 小于 0.5,可提高檢測靈敏度。

G6PDH 活力單位的計算:

1、血清(漿)G6PDH 活力的計算:

單位的定義:每 ml 血清(漿)每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。

G6PDHU/ml)=[ΔA×V 反總÷ε×d×109]÷V ÷T=857×ΔA 2、組織、細菌或細胞中 G6PDH 活力計算:

(1) 按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。

G6PDHU/mg prot)=[ΔA×V 反總÷ε×d×109]÷(V ×Cpr) ÷T=857×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計算

單位的定義:每 g 組織每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。

G6PDHU/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷ε×d×109]÷(W ×V ÷V 樣總)÷T=857×ΔA÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。

G6PDHU/104 cell)=[ΔA×V 反總÷ε×d×109]÷(500×V ÷V 樣總)÷T=1.715×ΔA

 

V 反總:反應體系總體積,8×10-4 L;εNADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.03 mlV 樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應時間, 5 minCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mlW:樣本質(zhì)量,g500:細菌或細胞總數(shù),500 萬。

 

 

實驗代做服務:

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化

熒光定量PCR

動物模型服務

流式細胞檢測

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

細胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實驗

microRNA測序

動物實驗

探針合成

ATP/ADP檢測

石蠟/冰凍切片

定點突變

線粒體膜電位(MMP)檢測

細胞生長曲線的測定

藥理毒理動物實驗

 

免疫共沉淀

真核表達載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標定量(Label-free)實驗

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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